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主营:S220/M220基因打断仪,Covaris超声波DNA破碎仪
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公司介绍
Covaris公司成立于1999年,是一家快速成长的生命科学仪器公司。它特有的仪器平台基于专利Adaptive Focused Acoustic (AFA)技术,为生物和化学样品制备带来了无与伦比的速度和效率。基于冲击波物理的AFA技术,能将能量精准地传输到生物和化学样品。整个过程具有非接触、恒温及快速的特点。全球领先的药物和生物技术公司都在使用Covaris的仪器用于RNA提取、化合物溶解、药物代谢物的组织提取以及许多其他应用。Covaris公司在全球超过25个国家销售了1000多台仪器。
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  • question 求大神帮助,关于我的过表达载体用pEGFP-N1质粒构建转染细胞的问题

    • answer 1.据我了解的,目的蛋白融合了GFP不会使得其功能改变吧,它只是一个绿色荧光蛋白,你要是有这方面担忧的话,病毒构建包被之前就可以选择不带荧光的病毒质粒,对照组也不带。2.转染效率的摸索一个是通过GFP,可以比较直观的证明基因转入细胞,有相关的荧光图片,其实另一个也可以通过PCR、WB等这些间接证实基因转入细胞。最关键的,转染效率要结合病毒本身+细胞类型+细胞状态+操作等综合决定的,有些原代细胞本身就不好被转染,一转染死亡率很高,有些细胞需要耗费大量病毒才能转进去。
    • answer jassom 目的蛋白基因+2A+GFP基因 这个序列插入你的载体,把载体用lipo转进细胞,它会表达2种蛋白,1是你的目的蛋白,2是GFP蛋白,二者是分开的。跑WB你只需目的蛋白条带加两个A,是指丙氨酸?这就能两个蛋白质分开了?需要添加IRES序列才能分开成两个蛋白质吧
    • answer 楼主你做好了吗,请问楼主用的是什么试剂呀,这个【汉恒无缝克隆试剂盒】好用吗我准备用一下,不知道好不好用
    • answer 目的蛋白基因+2A+GFP基因 这个序列插入你的载体,把载体用lipo转进细胞,它会表达2种蛋白,1是你的目的蛋白,2是GFP蛋白,二者是分开的。跑WB你只需目的蛋白条带
    • answer 那请问楼上二位,如果我是融合gfp蛋白,在做wb的时候,是不是我的蛋白分子量要加上gfp蛋白的分子量,在切胶的时候位置要比原来目的蛋白的位置要偏大点儿?
    • answer 蛋白和GFP之间加个2A,它们的功能不影响
    • answer 是分开的。建议楼主多看看文献
    • 收起
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